基于羟基磷灰石的丹酚酸组分磷脂复合物共沉淀物的制备研究(1)
[摘要]该实验旨在制备丹酚酸组分磷脂复合物的羟基磷灰石(HA)共沉淀物，以提高药物的体外溶出，同时改善丹酚酸组分磷脂复合物的粉体学性质。首先采用溶剂法制备共沉淀物，以丹酚酸组分中的丹酚酸B和丹参素为指标成分考察其体外溶出，同时对其进行粉体学性质的考察，并利用DSC，XRD，FTIR等表征手段对其结构特征进行分析研究。结果可得丹酚酸组分磷脂复合物与羟基磷灰石按1∶2制备的共沉淀物的体外溶出效果较好，60 min时药物的体外累积溶出率达到90%以上；粉体学性质考察结果表明该共沉淀物流动性良好，吸湿性低，粉体学性质得到了较大的改善，微观结构的表征分析表明药物仍旧以非晶形式存在。该实验的制备工艺简单可行，具有实际应用价值。
[关键词]丹酚酸组分磷脂复合物； 羟基磷灰石； 共沉淀物； 粉体学性质
中药组分多成分特点决定其生物药剂学性质外在表观的复杂性，采用单一制剂手段改善组分中多成分性质，未能完全解决组分药剂学性质存在的问题[1]。本课题组前期实验[2]研究采用磷脂复合物技术改善丹酚酸组分透膜吸收差的理化性质，结果表明以大豆磷脂为制剂辅料制备的丹酚酸组分磷脂复合物能一定程度上改变丹酚酸组分的理化性质，提高了药物的亲脂性，但所制备的丹酚酸组分磷脂复合物黏度较大，制剂时难于混合均匀，同时导致体外溶出有所降低。为此，本课题组进一步研究将固体分散技术[3-4]引入磷脂复合物中，以羟基磷灰石为辅料制备共沉淀物，以改善磷脂复合物的粉体学性质，提高药物的体外溶出度。
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1 材料
Agilent 1200高效液相色谱仪(包括四元泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器)， ZRS-8G型智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)；EyeTech-激光粒度粒形分析仪(荷兰安米德Ankersmid有限公司)；DSC204差示扫描量热仪(德国Netzsch公司)；D8型X-射线衍射仪(德国Bruker公司)；470-傅立叶红外光谱仪(美国Nicolet公司)；UV-2450型紫外分光光度仪(日本岛津)。
丹酚酸组分(含量>70%，其组成为10.92%丹参素、50.2%丹酚酸B，西安小草植物科技有限责任公司，批号20121204)；丹酚酸B，丹参素对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为111562-200807，110855-200504)；羟基磷灰石(南京埃普瑞纳米材料有限公司，批号EM110917314，纯度99%，粒径为20 nm)；无水乙醇等试剂均购自国药集团化学试剂有限公司。乙腈为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 丹酚酸指标成分的含量测定
2.1.1 色谱条件 Hedera ODS-2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相乙腈-水-甲酸(85∶15∶0.1)；流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃。检测波长281 nm。
2.1.2 标准曲线的制备 精密称取丹参素对照品3.69 mg，丹酚酸B对照品10.04 mg分别置于50 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，得质量浓度为73.80，200.08 mg·L-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.5，4.0，5.0，7.5 mL至10 mL量瓶中，用70%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，进行HPLC测定其对应的峰面积，以质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：丹参素y=5.911 6x+11.828，r=0.999 7；丹酚酸B y = 9.736 3x-63.733，r=0.999 6。结果表明，各指标成分在测定浓度范围内线性关系良好。
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2.1.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液，重复进样6次，测定其峰面积，得丹参素、丹酚酸B的RSD 分别为2.0%，1.4%，表明该方法精密度良好。
2.1.4 稳定性试验 精密吸取对照品溶液，分别在0，2，4，6，8，12 h进样，测定其峰面积值，得丹参素、丹酚酸B的RSD分别为1.9%，2.2%，表明该对照品溶液在12 h内稳定。
2.1.5 重复性试验 精密称取同一份丹酚酸磷脂复合物及其羟基磷灰石共沉淀物各6份，平行配制一定浓度的6份供试品溶液，分别进样，测定峰面积，丹酚酸磷脂复合物中丹参素、丹酚酸B的RSD分别为1.2%，1.7%；共沉淀物中丹参素、丹酚酸B的RSD分别为1.6%，1.9%，表明重复性均良好。
2.1.6 回收率试验 精密称取已知含量的丹酚酸磷脂复合物及其羟基磷灰石共沉淀物，制备成供试品溶液6份，分别加入丹参素和丹酚酸B对照品溶液适量，精密吸取混合溶液1 mL，用70%甲醇定容至10 mL，分别进样，测定并计算平均回收率和RSD。丹酚酸磷脂复合物中丹参素、丹酚酸B的平均回收率分别为99.01%，98.87%，RSD分别为1.4%，2.0%；共沉淀物中丹参素、丹酚酸B的平均回收率分别为100.7%，98.49%，RSD分别为1.5%，2.2%。
2.2 丹酚酸磷脂复合物与羟基磷灰石共沉淀物的制备及体外溶出试验
2.2.1 共沉淀物的制备 根据本课题前期实验基础，称取丹酚酸组分100.0 mg和大豆磷脂150.0 mg溶于20.0 mL四氢呋喃中，40 ℃条件下反应3 h后，减压除去反应溶剂，再加入适量的二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及复合物，抽滤，同时滤液再次减压干燥，蒸干即得丹酚酸组分磷脂复合物。称取所制备的丹酚酸组分磷脂复合物适量，加入适量无水乙醇溶解，按复合物与载体质量比为1∶0.5，1∶1，1∶2，1∶3精密称取羟基磷灰石，分散于上述溶液中，充分混匀，40 ℃减压条件下，旋转蒸发除去溶剂，干燥，研磨，过80目筛，即得，置干燥器内保存备用。, 百拇医药(陈小云 张振海 刘丹 孙娥 贾晓斌)
[关键词]丹酚酸组分磷脂复合物； 羟基磷灰石； 共沉淀物； 粉体学性质
中药组分多成分特点决定其生物药剂学性质外在表观的复杂性，采用单一制剂手段改善组分中多成分性质，未能完全解决组分药剂学性质存在的问题[1]。本课题组前期实验[2]研究采用磷脂复合物技术改善丹酚酸组分透膜吸收差的理化性质，结果表明以大豆磷脂为制剂辅料制备的丹酚酸组分磷脂复合物能一定程度上改变丹酚酸组分的理化性质，提高了药物的亲脂性，但所制备的丹酚酸组分磷脂复合物黏度较大，制剂时难于混合均匀，同时导致体外溶出有所降低。为此，本课题组进一步研究将固体分散技术[3-4]引入磷脂复合物中，以羟基磷灰石为辅料制备共沉淀物，以改善磷脂复合物的粉体学性质，提高药物的体外溶出度。
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1 材料
Agilent 1200高效液相色谱仪(包括四元泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器)， ZRS-8G型智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)；EyeTech-激光粒度粒形分析仪(荷兰安米德Ankersmid有限公司)；DSC204差示扫描量热仪(德国Netzsch公司)；D8型X-射线衍射仪(德国Bruker公司)；470-傅立叶红外光谱仪(美国Nicolet公司)；UV-2450型紫外分光光度仪(日本岛津)。
丹酚酸组分(含量>70%，其组成为10.92%丹参素、50.2%丹酚酸B，西安小草植物科技有限责任公司，批号20121204)；丹酚酸B，丹参素对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为111562-200807，110855-200504)；羟基磷灰石(南京埃普瑞纳米材料有限公司，批号EM110917314，纯度99%，粒径为20 nm)；无水乙醇等试剂均购自国药集团化学试剂有限公司。乙腈为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。
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2 方法与结果
2.1 丹酚酸指标成分的含量测定
2.1.1 色谱条件 Hedera ODS-2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相乙腈-水-甲酸(85∶15∶0.1)；流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃。检测波长281 nm。
2.1.2 标准曲线的制备 精密称取丹参素对照品3.69 mg，丹酚酸B对照品10.04 mg分别置于50 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，得质量浓度为73.80，200.08 mg·L-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.5，4.0，5.0，7.5 mL至10 mL量瓶中，用70%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，进行HPLC测定其对应的峰面积，以质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：丹参素y=5.911 6x+11.828，r=0.999 7；丹酚酸B y = 9.736 3x-63.733，r=0.999 6。结果表明，各指标成分在测定浓度范围内线性关系良好。
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2.1.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液，重复进样6次，测定其峰面积，得丹参素、丹酚酸B的RSD 分别为2.0%，1.4%，表明该方法精密度良好。
2.1.4 稳定性试验 精密吸取对照品溶液，分别在0，2，4，6，8，12 h进样，测定其峰面积值，得丹参素、丹酚酸B的RSD分别为1.9%，2.2%，表明该对照品溶液在12 h内稳定。
2.1.5 重复性试验 精密称取同一份丹酚酸磷脂复合物及其羟基磷灰石共沉淀物各6份，平行配制一定浓度的6份供试品溶液，分别进样，测定峰面积，丹酚酸磷脂复合物中丹参素、丹酚酸B的RSD分别为1.2%，1.7%；共沉淀物中丹参素、丹酚酸B的RSD分别为1.6%，1.9%，表明重复性均良好。
2.1.6 回收率试验 精密称取已知含量的丹酚酸磷脂复合物及其羟基磷灰石共沉淀物，制备成供试品溶液6份，分别加入丹参素和丹酚酸B对照品溶液适量，精密吸取混合溶液1 mL，用70%甲醇定容至10 mL，分别进样，测定并计算平均回收率和RSD。丹酚酸磷脂复合物中丹参素、丹酚酸B的平均回收率分别为99.01%，98.87%，RSD分别为1.4%，2.0%；共沉淀物中丹参素、丹酚酸B的平均回收率分别为100.7%，98.49%，RSD分别为1.5%，2.2%。
2.2 丹酚酸磷脂复合物与羟基磷灰石共沉淀物的制备及体外溶出试验
2.2.1 共沉淀物的制备 根据本课题前期实验基础，称取丹酚酸组分100.0 mg和大豆磷脂150.0 mg溶于20.0 mL四氢呋喃中，40 ℃条件下反应3 h后，减压除去反应溶剂，再加入适量的二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及复合物，抽滤，同时滤液再次减压干燥，蒸干即得丹酚酸组分磷脂复合物。称取所制备的丹酚酸组分磷脂复合物适量，加入适量无水乙醇溶解，按复合物与载体质量比为1∶0.5，1∶1，1∶2，1∶3精密称取羟基磷灰石，分散于上述溶液中，充分混匀，40 ℃减压条件下，旋转蒸发除去溶剂，干燥，研磨，过80目筛，即得，置干燥器内保存备用。, 百拇医药(陈小云 张振海 刘丹 孙娥 贾晓斌)